雙抗體夾心法

      你好朋友，很高興為你解答，根據(jù)你的描述，現(xiàn)在這群檢測(cè)艾滋病的方法，都是準(zhǔn)確性比較高的，艾滋病的窗口期一般是2到6周，最終排除是三個(gè)月到半年。
      

      雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原最常用的方法,操作步驟如下：
      1） 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體.洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì).
      2） 加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng).標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物.
       洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì).
      3） 加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng).固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合.徹底洗滌未結(jié)合
       的酶標(biāo)抗體.此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān).
      4） 加底物顯色.固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物.通過(guò)比色,測(cè)知標(biāo)本中抗原的量.
       在臨床檢驗(yàn)中,此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,
      AFP,hCG等.只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合
      物而建立此法.如抗體的來(lái)源為抗血清,包被和酶標(biāo)用的抗體最好分別取自不同種屬的動(dòng)
      物.如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相
      載體和制備酶結(jié)合物.這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)
      抗體一起保溫反應(yīng),作一步檢測(cè).
       在一步法測(cè)定中,當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí),過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)
      抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物".類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象,此時(shí)反應(yīng)
      后顯色的吸光值（位于抗原過(guò)剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線（位于抗體過(guò)剩帶上）某一抗原濃度的
      吸光值相同（參見(jiàn)1.3.2,圖1-4）,如按常法測(cè)讀,所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量,這種現(xiàn)
      象被稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect）,因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落.鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重
      時(shí),反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果.因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常
      增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等）時(shí),應(yīng)注意可測(cè)范圍的最高值.用
      高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng).
       假使在被測(cè)分子的不同位點(diǎn)上含有多個(gè)相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可
      用針對(duì)此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物.但在HBsAg的檢測(cè)中應(yīng)注意亞型
      問(wèn)題,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4個(gè)亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)
      性,這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問(wèn)題.
       雙抗體夾心法測(cè)抗原的另一注意點(diǎn)是類風(fēng)濕因子（RF）的干擾.RF是一種自身抗
      體,多為IgM型,能和多種動(dòng)物IgG的Fc段結(jié)合.用作雙抗體夾心法檢測(cè)的血清標(biāo)本中如含
      有RF,它可充當(dāng)抗原成份,同時(shí)與固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合,表現(xiàn)出假陽(yáng)性反應(yīng).采用
      F（ab’）或Fab片段作酶結(jié)合物的試劑,由于去除了Fc段,從而消除RF的干擾.雙抗體
      夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項(xiàng)考核指標(biāo)（參見(jiàn)6.2）.
       雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原,但不適用于測(cè)定半抗原及小
      分子單價(jià)抗原,因其不能形成兩位點(diǎn)夾心.
      
      以上是對(duì)“雙抗體夾心法”這個(gè)問(wèn)題的建議，希望對(duì)您有幫助，祝您健康！